細胞室一般就是負責單克隆抗體、HIV、體細胞等治療制劑和診斷試劑、生產用細胞及牛血清等檢驗的實驗室;并包括負責相應品種國家藥品標準、一類新藥和進口藥品標準的技術審核、復核、修訂或起草等;負責相應品種國家標準物質的研制、標定和分發;開展相應技術方法研究及技術人員培訓。
病理科細胞室主要服務于臨床,為臨床醫生提供及時而準確的細胞學檢查結果,它通過無創或微創的方式,既減輕病人檢查時的痛苦又可以獲得客觀的結果。
一、細胞室如何設置
1.無菌操作細胞室:
1)由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。
2)更衣間:位于培養室zui外部,用于更換潔凈的衣帽鞋口罩。放置消毒的防護服、衣帽柜、鞋柜。
3)緩沖間:位于更衣間與操作間之間,目的是為了保證操作間的無菌環境。放置電冰箱、液氮灌、消毒好的無菌物品等。
4)操作間:位于內部,于無菌操作、細胞培養。放置凈化工作臺及二氧化碳培養箱,離心機,倒置顯微鏡等。
房間要求:獨立房間,按潔凈廠房要求建造,并需要保持空氣消毒和清潔無塵:
1)紫外線燈—產生臭氧,并且室內溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康。
2)空氣過濾的恒溫恒濕裝置的空氣潔凈度級別如下:
注:空氣潔凈度級別表:一般普通培養室常選用100000級的。
2. 準備室:常設置在無菌操作細胞室外部,主要進行培養液及有關培養用的液體等的制備。主要設置:離心機、水浴鍋、定時鐘表、普通天平及日常分析處理物。
3. 洗刷消毒間:要和其他區域分開,獨立一室,主要用于各種培養器皿的清洗、準備和消毒,常設置:烘箱、高壓蒸汽消毒鍋、去離子水或者蒸餾水處理器、酸缸、水槽刷子等。
二、細胞室常用的基本設備
1.儀器:
1)超凈工作臺-常用側流式(垂直流)工作臺,潔凈度應達到100級。國內產品一般都可以達標。視場地大小選用一個較寬的或者多個較小的。
2)顯微鏡:倒置熒光顯微鏡,若有條件,尚可配置帶有照相系統的高質量相差顯微鏡、解剖顯微鏡、錄像系統或縮時電影拍攝裝置等,以便隨時觀察、記錄、攝影細胞生長情況。
3)CO2培養箱:需國外產品。
4)干燥箱:電熱干燥箱升溫較高,一般需達到160℃以上。國內產品可達標。
5)水純化裝置:產生去離子水,可用三蒸水替代。
6)冰箱:低溫冰箱(-20℃)可選國內的、超低溫冰箱(-70,80C,)需要國外產品。
7)液氮罐:國內產品可。
8)離心機:國內產品可,低速離心機即可,不需要低溫冷凍。用于細胞沉降,高速不好。
9)精密電子天平:國產即可,需達到精密度:分析天平的感量為0.1mg、0.01mg和0.001mg。
10)消毒器:高壓蒸汽消毒鍋,國產。
11)濾器:用于過濾培養基,國產進口都可。
2.常用的培養器皿:
1)培養瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養、繁殖細胞。進行培養時培養瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養。國產培養瓶的規格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進口培養瓶則多以底面積(cm2)表示。
2)培養皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分離、處理組織或做細胞毒性、集落形成、單細胞分離、同位素摻入、細胞繁殖等實驗使用。常用的培養皿規格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。
3)多孔培養板:為塑料制品??晒┘毎寺〖凹毎拘缘雀鞣N檢測實驗使用。其優點是節約樣本及試劑,可同時測試大量樣本,易于進行無菌操作。培養板分為各種規格,常用的規格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
4)培養操作有關的器皿:
a)貯液瓶:主要用于存放或配制各種培養用液體如培養液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規格,如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。
b)吸管:主要分為刻度吸管、無刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、轉移液體,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管,除可以作吸取、轉移液體外,彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細胞。
c)加樣器(移液器):用于吸取、移動液體或滴加樣本??筛鶕枰{節量的大小,吸量準確、方便。尤以微量加樣器,可保證實驗樣品(或試劑)含量,重復性良好。目前,可高溫消毒的,多通道的各類移液器可供使用者選擇,能確保加樣準確、快速、方便并且達到無菌要求。
d)其他用品:尚有收集細胞用的離心管,放置試劑或臨時插置吸管用的試管,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭,封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細胞用的安瓿或凍存管、不同規格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗,超凈工作臺使用的酒精燈,供實驗人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。
三、細胞室管理規章制度
細胞室是進行各種細胞培養的凈化級實驗室,所有進入實驗室的人員都必須遵守實驗室有關的規章制度,接受實驗室管理人員的管理。
*章 總則
*條細胞室主要由團隊內相關科研人員使用,原則上不對外開放,其他人員如確實需使用細胞室必須預先征得實驗室負責人和細胞室負責人同意。
第二條進出細胞室實驗需要嚴格登記。如有不符合實驗室工作和生物安全要求的,實驗室負責人和細胞室工作人員有權責令整改。
第三條使用人員需參加專門的細胞室使用規范培訓并通過考核后,方可獲準進入細胞室進行實驗。嚴禁未經許可擅自進入細胞室或使用相關設備。
第四條細胞室正常使用過程中,人員進出應通過緩沖間和風淋間;進出實驗室的器械和樣品需通過傳遞窗,嚴禁隨身帶入。實驗用品應盡量一次帶入,嚴禁將與實驗無關的物品帶入實驗室,在細胞室內不得進行微生物等其它易污染物的培養,禁止從事任何高危生化實驗。
第五條實驗人員應愛護實驗室各類儀器,按照規則使用并保持設備清潔。實驗中的昂貴設備,未經許可不得擅自開關。精密儀器需經專門培訓后方能操作未經許可不得改變設備儀器的預設參數。設備儀器出現故障或發生事故,應及時向實驗室負責人報告,安排專業人員進行檢修。
第二章 條例
*條 常規操作
1.穿著實驗服。實驗人員必須在細胞室緩沖間內更換細胞室實驗服,嚴禁不穿實驗服或直接穿著普通實驗室實驗服進入細胞室。
2.穿著拖鞋。在準備間換下自己的鞋子,盡量避免在緩沖間走動、停留。
3.細胞室zui多可6個人同時使用。
4. 實驗過程中嚴禁喧嘩,閑聊,反復進出細胞室。
第二條 培養箱使用規則
1. 從培養箱取放物品前,用酒精清潔雙手(或手套),盡量縮短開門時間和減少開門次數。
注: 培養箱中的空氣是經過過濾的潔凈空氣。長時間敞開或頻繁開關培養箱,容易造成污染。
2.從培養箱拿取細胞時輕拿輕放,動作迅速,隨手關緊培養箱門。未經允許,禁止翻看、移動他人細胞或樣品,如有特殊需要的,請實驗室負責人協調。
3. 培養瓶皿放入培養箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精揮發后再放入,以免培養箱內滯留過多乙醇蒸氣。
4. 培養箱內細胞培養的放置需整潔有序,方便查找,同時應盡量提高培養箱的使用效率,負責老師可視實驗情況啟用或停止空培養箱的使用,節約資源。
5. 普通培養中的細胞,若非實驗特殊需要,每瓶/板細胞每天只需要觀察生長狀態一次,2人以上共用的細胞,可約好時間一起觀察。
注:頻繁將細胞拿出觀察,容易給培養箱造成污染,同時也會影響細胞生長條件的恒定。
6.原代細胞需放置在原代培養培養箱培養,不得放置于其他培養箱,如一段時間內無原代細胞實驗,負責人可協調安排培養箱供其他細胞培養使用。
7.實驗人員應經常注意檢查培養箱溫度、CO2氣體量是否相符設定值。密切注意培養箱內的增濕盤,定期更換無菌水并進行消毒。密切注意培養箱內情況,如出現霉變、菌斑、支原體和衣原體感染或其他明顯染菌跡象,應立即通知管理員及其它使用者。
第三條 顯微鏡使用規則
1.倒置相差顯微鏡使用前,用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺。
2.離開細胞室時或較長時間不需使用時,及時關上電源,延長燈泡壽命。盡量避免頻繁開關顯微鏡電源。
3.一次細胞實驗使用完畢后,在顯微鏡使用記錄本上登記。
4.熒光顯微鏡屬于貴重儀器需遵循貴重儀器預約使用規程。
第四條 超凈臺相關操作規則
1.超凈臺使用遵循預約原則。在細胞室入口處預約,細胞室內填寫使用登記。
a:無預約者若有必要在他人預約時段內使用,需先征得預約者的同意,否則應無條件讓出工作臺,以免耽誤他人實驗。
b:使用記號筆在預約表格上提前預約下一周的使用時間,請注意周六周日是指上周的周末。
c:預約內容請包括:時間范圍,姓名,如特殊實驗請寫明。
2.超凈臺使用前用紫外燈照射15分鐘滅菌,使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區消毒,所有物品放入超凈臺內使用前均應消毒,超凈臺內嚴禁堆放過多物品影響風路平衡,不同超凈臺內物品嚴禁頻繁交換使用。
3.點燃酒精燈前需檢查瓶中酒精是否足夠,液面應占瓶高1/3-2/3。
注: 消毒用75%的酒精,酒精燈用95%以上的酒精,向噴壺或燈內添加酒精時請留意。
4.超凈臺中應擺放廢液杯,用于暫時存放廢棄物,實驗結束后將杯內加入NaOH溶液處理片刻,廢液垃圾倒入水池并同時用水沖釋,固體垃圾倒入生物樣品垃圾桶中。
注: 廢液缸應及時處理,嚴禁長時間放置,以免留有大量培養液滋生細菌。
5.細胞實驗后任何含有細胞培養污物的培養瓶,離心管,移液管等必須及時帶出細胞房。
第五條 器具的清洗規則
1.可回收的移液管、離心管、培養瓶皿等,放入裝有清水的塑料桶中浸泡,桶內需有足量的清水以沒過浸泡物品。
注: 可回收器皿必要時先初步涮洗后再放入桶內,尤其是培養瓶或血清管中有大量高營養的液體殘留時,容易使桶內的清水長菌。保證浸泡的瓶、管內*被清水充滿,而不是在裝有大量空氣的情況下被壓倒桶底?! ?br />2.清水沖洗后及時放入酸缸浸泡,應由使用者本人及時清洗晾干備用,操作時請注意帶橡膠手套,小心操作。
注: 禁止長時間浸泡于清水中,此時細菌可能已在桶中生長并釋放內毒素。細菌內毒素很難通過常規濕熱滅菌步驟去除干凈,即使干烤也不能保證其*失活。內毒素對細胞生長及多種實驗均有較大影響。
洗滌程序:清水沖十次以上去除重金屬殘留,然后沖去離子水5次,再用超純水5次,倒置于烘箱中晾干。并及時包扎滅菌。
第六條 冰箱、試劑等相關操作規則
1.從冰箱取放物品動作要迅速,關門時要檢查門是否關好。按類別存放試劑。嚴禁長時間敞開冰箱門。
2.各人存放于冰箱內的培養液、生化試劑、樣品要注明姓名、配制日期、樣品名稱,特殊試劑需獲得細胞室管理人員同意后方能放置。不得使用他人的培養液或其他生化試劑。
3.分裝好的血清長時間保存于-80℃,使用前放于4℃預解凍。原則上解凍好的血清應全部配成含血清的培養基備用,若有剩余,則暫存于4℃并盡快使用。盡量不要使用他人開過的血清,以免交叉污染。
4.細胞室內的冰箱空間有限,盡量僅放置使用頻率較高的試劑。請勿將一些閑置試劑,污染試劑長期放置在細胞室。
5.工作人員會定期對冰箱進行清理,發現無標記,過期試劑等違規物品將全部清除出去,并且查找試劑配置人給予警告。
第七條 進入細胞室物品控制
1.所有進入細胞室的物品需經過傳遞窗,盡量經過紫外照射,酒精表面消毒。
2.嚴禁將可能含有污染物或病原菌的實驗物品帶入細胞室。
3.細胞室內僅放置少量實驗必須耗材即可,不得整箱搬入,出現潔凈室內物品堆積狀況。
4.細胞室內儲物柜的物品放置由相關管理人員安排,并做標記。
第八條 細胞室清潔守則
1.每周值日生時間從周六開始,至下周五結束。
2.日常維護:注意培養箱顯示正常,顯微鏡,冰箱,超凈臺的正常使用與維護。細胞室內以及門口生物樣品垃圾桶的及時清理。
3.每周大清潔:每周五下午五點用新潔爾滅打掃細胞室。
清潔順序:擦超凈臺(用酒精棉球);用新潔爾滅擦桌面,培養箱,超凈臺以及冰箱外壁,及桌上的儀器,細胞室墻面,傳遞窗,風淋室;給水浴鍋加水或換水,細胞室衣柜和拖鞋擺放整齊,拖地,紫外消毒細胞室30分鐘。
注:若上周值日生及時給培養箱內水槽加足水,根據經驗未來一周內培養箱不會干水,但值日生仍應經常檢查,以便及時發現異常情況。切記給培養箱加滅菌水。
4.在沒有出現問題的情況下,每2個月清潔一次培養箱:先將培養箱中的物品取出暫存于超凈臺內,對于比較敏感的細胞可以暫存于另一個培養箱;將培養箱內的不銹鋼板取出,包括4塊橫板和左右2塊立著的架子,用酒精棉球清潔鋼板和培養箱內壁;啟動培養箱自消程序。
第九條 人員培訓
1.由將要做細胞實驗的人員提出申請,填寫細胞室使用申請表。
2.細胞室負責老師視申請人數酌情安排培訓時間,培訓內容包括安全培訓、理論知識與實踐操作培訓。
3.培訓考核合格后由導師、培訓老師、細胞室負責人簽字確認授予其細胞室使用權限。
4.培訓不合格者重新參加培訓。
第十條 制度的實施與處罰
1.細胞室負責人以及管理人員密切關注細胞室的使用情況,發現違反規章操作者首先給予提醒,但須做記錄。
2.對于一周內違反3次以內者予以警告,3-5次者給予停止細胞室使用權限2周,超過5次者停用其對細胞室使用權限,需重新參加培訓后才能再次使用。
第三章 附則
本規章制度從公布之日起開始執行,由生物醫學工程團隊實驗室管理委員會負責解釋及更正。本實驗室追求不斷地進步,各位老師及使用人員若有良好的建議可與細胞室負責人或實驗室管理委員會成員溝通,我們會及時協調,旨在為團隊提供和諧,的實驗條件。